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                      當前位置:首頁  >  技術(shù)文章  >  完整的細胞培養(yǎng)全流程及胎牛血清的要求

                      完整的細胞培養(yǎng)全流程及胎牛血清的要求

                      更新時間:2024-07-24  |  點擊率:390

                      在生物醫(yī)學和細胞生物學研究中,細胞培養(yǎng)是一項基礎(chǔ)而核心的技術(shù)。它不僅為科學家提供了觀察和研究細胞行為、生理、病理過程的平臺,還是藥物研發(fā)、基因治療等領(lǐng)域重要的實驗手段。完整的細胞培養(yǎng)全流程涉及多個精心設(shè)計的步驟,其中,胎牛血清(Fetal Bovine Serum, FBS)作為培養(yǎng)基的關(guān)鍵成分,其選擇和使用對細胞培養(yǎng)的成功至關(guān)重要。

                       

                      一、完整的細胞培養(yǎng)全流程

                      1、準備階段:

                      設(shè)備清洗與消毒:確保所有用于細胞培養(yǎng)的器具(如培養(yǎng)皿、移液管、離心管等)干凈無菌,常通過高壓蒸汽滅菌或紫外線照射等方法進行消毒。

                      培養(yǎng)基配制:根據(jù)細胞類型和培養(yǎng)需求,選擇合適的培養(yǎng)基并加入必要的生長因子、抗生素等添加劑,最后按比例加入胎牛血清。

                      2、細胞復(fù)蘇(對于一開始培養(yǎng)或需要繼續(xù)培養(yǎng)的凍存細胞):

                      將凍存的細胞從液氮或超低溫冰箱中取出,迅速置于37℃水浴中解凍。

                      解凍后的細胞懸液加入含有預(yù)熱培養(yǎng)基的離心管中,輕輕混勻后離心去除凍存液。

                      用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞,并接種到培養(yǎng)皿中。

                      3、細胞培養(yǎng):

                      將接種好的細胞置于適宜條件(如溫度、濕度、CO?濃度)的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

                      定期檢查細胞生長情況,包括細胞形態(tài)、密度和培養(yǎng)基顏色等,必要時進行換液或傳代。

                      4細胞傳代:

                      當細胞生長至鋪滿培養(yǎng)皿底部約80%-90%時,進行傳代操作。

                      移除舊培養(yǎng)基,用無菌PBS清洗細胞表面。

                      加入適量的消化液(如胰蛋白酶),在適宜條件下消化細胞。

                      消化完成后,加入含血清的培養(yǎng)基終止消化,并輕輕吹打使細胞脫壁形成懸液。

                      將細胞懸液分裝到新的培養(yǎng)皿中繼續(xù)培養(yǎng)。

                      5、細胞凍存:

                      對于暫時不需要培養(yǎng)或需長期保存的細胞,可進行凍存處理。

                      使用含有DMSO等冷凍保護劑的凍存液重懸細胞,并分裝到凍存管中。

                      按照一定的降溫程序(如4℃-20℃-80℃梯度降溫)將細胞凍存管轉(zhuǎn)移至液氮罐中長期保存。

                       

                      二、對胎牛血清的要求

                      胎牛血清是細胞培養(yǎng)中常用的天然培養(yǎng)基添加劑之一,它含有多種生長因子、激素、維生素和其他營養(yǎng)物質(zhì),對細胞的生長和分化起著至關(guān)重要的作用。然而,不同來源、批次和加工方式的胎牛血清在質(zhì)量上可能存在差異,因此在使用過程中需要滿足以下要求:

                       

                      無菌性:胎牛血清必須是無菌的,以避免引入微生物污染導(dǎo)致細胞培養(yǎng)失敗。

                      內(nèi)毒素含量低:內(nèi)毒素是細菌死亡后釋放的有毒物質(zhì),對細胞具有毒性作用。因此,要求胎牛血清中的內(nèi)毒素含量必須控制在極低水平。

                      營養(yǎng)豐富且穩(wěn)定:胎牛血清應(yīng)含有豐富且穩(wěn)定的生長因子和其他營養(yǎng)物質(zhì),以支持細胞的正常生長和增殖。同時,不同批次之間的質(zhì)量差異應(yīng)盡可能小。

                      無外源因子污染:包括病毒、支原體等外源因子的污染會對細胞培養(yǎng)產(chǎn)生嚴重影響。因此,胎牛血清必須通過嚴格的檢測和篩選程序來確保其無外源因子污染。

                      適合細胞類型:不同細胞類型對營養(yǎng)物質(zhì)的需求可能不同。因此,在選擇胎牛血清時需要考慮細胞類型的特異性需求,并選擇與細胞類型相匹配的血清。

                       

                      Ausbian進口胎牛血清,內(nèi)毒素含量低,≤3EU/ml,通過各項無菌檢測;多批次平行供應(yīng),滿足各種實驗需求。


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