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PCR相關(guān)實(shí)驗(yàn)在現(xiàn)代生命科學(xué)研究中發(fā)揮著重要作用。在PCR相關(guān)實(shí)驗(yàn)中，會(huì)用到各種酶試劑，這些試劑關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的成功與否。其中，DNA聚合酶在DNA和RNA的操控、合成和分析中都發(fā)揮著難以替代的作用，成為科學(xué)家們揭示分子生物學(xué)奧秘的有力的工具。
本期內(nèi)容，盤(pán)點(diǎn)PCR實(shí)驗(yàn)中常用的DNA聚合酶試劑。
DNA聚合酶（DNA Polymerase）參與DNA分子的合成過(guò)程。它在細(xì)胞中的主要功能是在DNA復(fù)制中負(fù)責(zé)合成新的DNA鏈。
DNA聚合酶使用DNA模板上的信息，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則（A-T，C-G配對(duì)），從5'→3'，即從新鏈的5'端到3'端進(jìn)行，在新鏈上加入互補(bǔ)的核苷酸。DNA聚合酶只能在已存在的DNA鏈上進(jìn)行合成，因此需要一個(gè)起始點(diǎn)，稱為引物（primer），來(lái)提供3'端的OH基團(tuán)，該過(guò)程一直持續(xù)到整個(gè)DNA鏈被復(fù)制完成。
除了PCR實(shí)驗(yàn)中，在生物體的細(xì)胞中，也有DNA聚合酶的參與，例如，幫助DNA損傷修復(fù)和維護(hù)基因組的完整性。
DNA聚合酶是一類酶的總稱，有多種種類，每種都具有不同的特性和應(yīng)用。
Taq DNA聚合酶
來(lái)源
從耐熱細(xì)菌Thermus aquaticus中分離得到。
特點(diǎn)
耐熱性：Taq DNA聚合酶的適宜工作溫度通常在70°C至75°C之間。這使得Taq DNA聚合酶非常適合PCR反應(yīng)，因?yàn)镻CR需要在每個(gè)循環(huán)中通過(guò)高溫步驟來(lái)分離DNA鏈。
5'→3'聚合酶活性 Taq DNA聚合酶具有5'→3'聚合酶活性，即它能夠在DNA鏈的5'端到3'端方向上合成新的DNA鏈。
沒(méi)有3'→5'外切酶活性 與一些其他DNA聚合酶不同，Taq DNA聚合酶不具備3'→5'外切酶活性，這意味著它缺乏校正能力，容易引入突變。因此，在PCR反應(yīng)中，Taq DNA聚合酶的錯(cuò)誤率相對(duì)較高。
DNA模板依賴性：Taq DNA聚合酶對(duì)于DNA模板的依賴性較強(qiáng)，需要引物（primer）提供3'端的OH基團(tuán)，作為新DNA鏈的起始點(diǎn)。
Pfu DNA聚合酶
來(lái)源
從嗜熱古細(xì)菌Pyrococcus furiosus中分離得到。
特點(diǎn)
高度的3'→5'外切酶活性：Pfu DNA聚合酶表現(xiàn)出高度的外切酶活性，使得其能夠進(jìn)行校對(duì)，糾正PCR反應(yīng)中可能發(fā)生的錯(cuò)誤。這有助于提高擴(kuò)增產(chǎn)物的準(zhǔn)確性。
高保真度：由于其強(qiáng)大的外切酶活性，Pfu DNA聚合酶在PCR反應(yīng)中具有更低的錯(cuò)誤率，提供高度保真的DNA合成。
溫度適應(yīng)性：Pfu DNA聚合酶在較高的溫度范圍內(nèi)（通常在72°C至75°C）表現(xiàn)出較高的活性，適用于PCR反應(yīng)的高溫步驟。
缺乏5'→3'外切酶活性：與一些其他聚合酶不同，Pfu DNA聚合酶通常不具備5'→3'外切酶活性，因此不會(huì)引入額外的5'端修飾。
大腸桿菌DNA聚合酶
來(lái)源
從大腸桿菌（Escherichia coli）中分離得到。
特點(diǎn)
多功能性：大腸桿菌中有三種不同類型的 DNA 聚合酶，即 DNA 聚合酶 Ⅰ、DNA 聚合酶 Ⅱ 和 DNA 聚合酶 Ⅲ，它們分別簡(jiǎn)稱為 PolⅠ、PolⅡ 和 PolⅢ。PolⅠ 和 PolⅡ 的主要功能是參與 DNA 的修復(fù)過(guò)程，而 PolⅢ 的功能看來(lái)是同 DNA 的復(fù)制有關(guān)。
基因克隆：大腸桿菌DNA聚合酶在基因克隆中廣泛應(yīng)用，用于合成DNA片段、連接DNA末端，是DNA構(gòu)建的關(guān)鍵工具之一。
PCR輔助：在PCR實(shí)驗(yàn)中，某些大腸桿菌DNA聚合酶的外切酶活性，比如：Klenow片段，可以用于擴(kuò)增產(chǎn)物末端的修飾，例如A添加（A-tailing）。
低錯(cuò)誤率：大腸桿菌DNA聚合酶通常具有相對(duì)較低的錯(cuò)誤率，這在一些實(shí)驗(yàn)中是需要考慮的因素。然而，與一些高保真度的DNA聚合酶相比，其準(zhǔn)確性可能較低。
來(lái)源
來(lái)自噬菌體T4的DNA聚合酶，屬于T4 DNA復(fù)制和修復(fù)機(jī)制中的關(guān)鍵酶之一。
特點(diǎn)
5'→3'聚合酶活性：T4 DNA聚合酶主要表現(xiàn)為5'→3'聚合酶活性，即在合成新的DNA鏈時(shí)，從DNA鏈的5'端到3'端方向進(jìn)行。
3'→5'外切酶活性：T4 DNA聚合酶還具有3'→5'外切酶活性，能夠修剪單鏈DNA的3'末端。在反向切除DNA片段時(shí)非常有用，例如在DNA修復(fù)和重組過(guò)程中。
缺乏核酸內(nèi)切酶活性：與一些其他T4 DNA復(fù)制酶不同，T4 DNA聚合酶通常不具有核酸內(nèi)切酶活性，因此不會(huì)切割雙鏈DNA。
依賴于引物：T4 DNA聚合酶在DNA合成時(shí)需要引物提供3'端的OH基團(tuán)，因此通常在反應(yīng)中需要引物的引導(dǎo)。
DNA末端修飾：T4 DNA聚合酶可用于在DNA末端進(jìn)行修飾，例如通過(guò)添加dA（腺嘌呤）或dG（鳥(niǎo)嘌呤）來(lái)形成A懸垂末端或G懸垂末端。
好物推薦
PCR實(shí)驗(yàn)
德國(guó)Minerva Biolabs公司生產(chǎn)的 Taq DNA聚合酶是一種高效的5‘→3’聚合酶，沒(méi)有3‘→5’外切核酸酶活性。在72℃和pH9的條件下，MB Taq DNA聚合酶達(dá)到其高水平的活性，能夠在30秒內(nèi)擴(kuò)增1 kb DNA。
Taq的活性在室溫時(shí)被阻斷，例如在準(zhǔn)備樣品時(shí)。當(dāng)溫度高于70℃時(shí)，Taq聚合酶的抑制被逆轉(zhuǎn)。在94℃2分鐘后聚合酶達(dá)到活化。MBTaq DNA聚合酶帶有10x緩沖液，能獲得更大產(chǎn)率和靈敏度，這應(yīng)符合大多數(shù)標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用。
MB Taq 熱啟動(dòng)DNA聚合酶推薦使用/范圍：
常規(guī)和多重PCR；實(shí)時(shí)PCR；T/A克隆；生物素或放射性核苷酸進(jìn)行DNA標(biāo)記；雙鏈或單鏈標(biāo)準(zhǔn)DNA測(cè)序
當(dāng)前位置：