一招教你如何遠(yuǎn)離支原體污染

更新時間：2022-09-22 | 點(diǎn)擊率：818

在疫苗生產(chǎn)、生物制藥，細(xì)胞免疫，Car-T，以及基礎(chǔ)科研過程中的細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)，支原體污染的預(yù)防和祛除，是保證生產(chǎn)質(zhì)量和實(shí)驗(yàn)順利的重要環(huán)節(jié)。

往期文章，已經(jīng)為大家介紹了『支原體檢測』的常規(guī)方法，其中包括熒光定量PCR方法的檢測試劑盒，以及可做方法學(xué)驗(yàn)證的標(biāo)準(zhǔn)品等。

本期文章，我們將進(jìn)一步、多角度的介紹『支原體祛除和預(yù)防』的常見簡便方法，希望對疫苗生產(chǎn)、生物制藥、細(xì)胞學(xué)研究等項(xiàng)目的質(zhì)檢質(zhì)控有所幫助。

關(guān)于整個細(xì)胞培養(yǎng)過程中支原體祛除與預(yù)防，我們將從以下三個方面展開：

一、工作區(qū)域中支原體祛除與預(yù)防

支原體可以說是“無處不在"，稍有不慎，環(huán)境中那些對細(xì)胞有害的支原體，很容易污染培養(yǎng)體系。

因此，應(yīng)將支原體的清除與預(yù)防，日常實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域的清潔、維護(hù)過程中。

除了正確穿戴實(shí)驗(yàn)防護(hù)用具外（如：口罩、細(xì)胞培養(yǎng)室專用實(shí)驗(yàn)服、鞋套等），還應(yīng)定期*清潔工作區(qū)域：用新捷爾滅等稀釋液進(jìn)行墻面、地面的噴灑和擦拭。對于桌面、實(shí)驗(yàn)臺面以及擺放了儀器設(shè)備的地方，應(yīng)選用針對性更強(qiáng)的支原體祛除預(yù)防試劑。

Minerva Biolabs Mycoplasma-off™就是一個不錯的選擇。該噴霧劑/濕巾中含有支原體專用殺除劑Mynox®，可在幾分鐘內(nèi)迅速殺除支原體，而且對葡萄球菌、腸球菌、大腸桿菌、奇異變形桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、牛腹瀉病毒、腺病毒、多瘤病毒、鼠諾如病毒、牛痘病毒、真菌孢子等微生物也有比較好的清除效果。

Mycoplasma-off™安全性高，沒有腐蝕性和致癌性成分，相比起其他消毒成分，將人體和實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備的消毒風(fēng)險(xiǎn)降至更低。

即用型消毒液，可以快速簡單地保持工作區(qū)的清潔干凈。

二、細(xì)胞培養(yǎng)體系中支原體祛除與預(yù)防

在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)時，如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞生長緩慢、甚至大量漂浮、細(xì)胞培養(yǎng)液提前變黃等情況，請務(wù)必警惕，有可能就是中了支原體的招。

對于珍貴的細(xì)胞株，我們往往希望可以拯救一下，首先可以用PCR/qPCR方法檢測細(xì)胞是否被支原體污染。

如細(xì)胞株已發(fā)生污染，采取以下三種方法處理，能在盡可能短的時間，高效祛除支原體，并有一定的預(yù)防能力：

1、Zell Shield®支原體祛除劑（培養(yǎng)基用）

適用范圍

細(xì)胞已發(fā)生支原體污染，但又不愿丟棄，希望繼續(xù)培養(yǎng)（如已轉(zhuǎn)染或大量擴(kuò)增的細(xì)胞）。
初始培養(yǎng)的原代細(xì)胞。
存在支原體污染高風(fēng)險(xiǎn)的細(xì)胞。

用法

1:100加入培養(yǎng)基。
當(dāng)細(xì)胞存在支原體污染時，應(yīng)先對細(xì)胞懸浮沖洗三次，再用含Zell Shield®培養(yǎng)基培養(yǎng)。每次傳代前都應(yīng)做懸浮沖洗處理。連續(xù)傳代4次，支原體即可祛除。

2、Mynox® Gold支原體祛除劑（珍貴細(xì)胞保種用）

適用范圍

被支原體污染的珍貴細(xì)胞或不易獲得的生物樣本（如細(xì)胞種子）。

用法

將「首CI治療液」加入到4.5ml培養(yǎng)基（FBS需≤5%）中，培養(yǎng)細(xì)胞（細(xì)胞數(shù)為104~105）。
細(xì)胞長至80%-90%匯合時，細(xì)胞傳代。將1管「鞏固防護(hù)液」加到9.5ml培養(yǎng)基中，用該培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
重復(fù)步驟2，細(xì)胞再傳代2次，支原體即*祛除。

注意：每次傳代時，最好都能把細(xì)胞懸浮沖洗三次，可取得更好的治療效果。

3、Mynox®支原體祛除劑（珍貴樣本用）