原代細(xì)胞培養(yǎng)也被稱為初代培養(yǎng)，是建立細(xì)胞系的第一步。

原代細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用廣泛：

1. 為研究生物體細(xì)胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段；

2. 為傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件；

3. 服務(wù)于臨床實(shí)踐，用于藥物篩選等。

其步驟包括取材→分離→培養(yǎng)和維持。

原代細(xì)胞培養(yǎng)需要一定的技巧，尤其是一些細(xì)節(jié)，不然很容易翻車，今天給大家匯總了一些原代細(xì)胞培養(yǎng)的小技巧，希望大家能有所收獲！

取材

取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)過程中的第一步，也是至關(guān)重要。

下表為一些常見組織的取材注意事項(xiàng)。

 

分離

一、組織塊培養(yǎng)法

1、組織塊接種后的前3天，在觀察和移動(dòng)的過程中，注意不要引起液體的振蕩。為保證組織塊附著于瓶壁上，要避免頻繁晃動(dòng)。

2、加入的培養(yǎng)液不宜過多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動(dòng)而脫落下來。

3、當(dāng)細(xì)胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細(xì)胞，它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會(huì)影響原代細(xì)胞的生長。

4、為促進(jìn)組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上，可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)瓶底壁上。

二、貼壁型原代細(xì)胞

1、原代培養(yǎng)的分離細(xì)胞，在初次接觸體外環(huán)境時(shí)，細(xì)胞之間會(huì)互相影響，產(chǎn)生一些促生長的活性物質(zhì)，促進(jìn)彼此的存活和生長。

因此，接種密度要適宜。如果接種的細(xì)胞密度過低，細(xì)胞之間的促生長作用很小，也很難使細(xì)胞適應(yīng)從體內(nèi)的組織環(huán)境到被分散后進(jìn)入獨(dú)立生存環(huán)境的變化過程；如果接種的細(xì)胞密度過大，會(huì)導(dǎo)致營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足，代謝廢物積累較快需要經(jīng)常換液和傳代。

2、盡快使接種的細(xì)胞貼壁，是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵。可以在接種后先將培養(yǎng)瓶置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3h到5h，待細(xì)胞貼壁后，再補(bǔ)足培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

三、懸浮型原代細(xì)胞

1、必須保持細(xì)胞的懸浮狀態(tài)。可以通過增加培養(yǎng)液的黏度來幫助細(xì)胞呈懸浮狀態(tài)，如給培養(yǎng)液中加入低濃度的透明質(zhì)酸復(fù)合物。在有攪拌裝置的培養(yǎng)器皿內(nèi)加入培養(yǎng)液，以5ml為最di限度，否則攪拌時(shí)會(huì)產(chǎn)生氣泡對(duì)細(xì)胞造成傷害。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過快，否則既容易使培養(yǎng)液溢出又容易造成污染。如果培養(yǎng)液的量在5ml以下，可以采用旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。給懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞換液時(shí)要注意不要吸出細(xì)胞。

2、能夠進(jìn)行懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞，其生命力一般都比較旺盛，體外分裂增殖的速度較快，營養(yǎng)成分消耗大，換液時(shí)間隔一般較短。

培養(yǎng)

當(dāng)原代細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，就可按照正常細(xì)胞培養(yǎng)流程進(jìn)行培養(yǎng)即可。

血清在細(xì)胞培養(yǎng)過程中的重要性不言而喻：

• 提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。

• 提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。

• 有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。

• 是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。

• 起酸堿度緩沖液作用。

• 提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活，保護(hù)細(xì)胞不受傷害。

• 參與細(xì)胞凍存。

• ......

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