為什么有些細(xì)胞實驗無法重復(fù)？

為什么有的細(xì)胞在相當(dāng)長的時間里，都養(yǎng)不到好狀態(tài)？

為什么實驗室中，超過一株以上的細(xì)胞都時好時壞？

細(xì)胞生長緩慢、細(xì)胞變形、碎片增加、懸浮細(xì)胞容易成團(tuán)、培養(yǎng)基提前變色、鏡下發(fā)現(xiàn)有小黑點(diǎn)……

如果排除了其他試劑選擇不當(dāng)、細(xì)胞株老化、細(xì)菌污染等原因，而仍有上述一種或幾種情況，則高度提示——你的細(xì)胞可能被支原體污染了！

圖. 電鏡下的支原體

支原體污染普遍存在

據(jù)美國數(shù)據(jù)統(tǒng)計，細(xì)胞發(fā)生支原體污染的幾率在70%以上。同時，由于支原體直徑很小，僅在180nm~350nm之間，只有通過電鏡才能看到，不易被實驗者肉眼發(fā)覺，支原體污染逐漸成為一個普遍存在的問題。

支原體污染的危害

支原體污染是個循序的過程，普通抗生素對其無效。因此，支原體污染有多煩人，相信實驗人都領(lǐng)教過了。

1、細(xì)胞狀態(tài)不佳，生長速度慢，實驗無法推進(jìn)。

2、細(xì)胞內(nèi)DNA、RNA及蛋白表達(dá)發(fā)生改變，影響實驗結(jié)果，導(dǎo)致實驗數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確，時間、經(jīng)費(fèi)的浪費(fèi)。

3、一株污染的細(xì)胞成為實驗室的污染源，對工作區(qū)域以及培養(yǎng)箱和液氮罐造成污染，進(jìn)而污染其他細(xì)胞，導(dǎo)致其他細(xì)胞繼發(fā)性污染，實驗受影響，數(shù)據(jù)無法重復(fù)，預(yù)期結(jié)果出不來。

如何有效把支原體趕出細(xì)胞？

對于已耗費(fèi)很多時間、大量擴(kuò)增起來的細(xì)胞，或經(jīng)過基因轉(zhuǎn)染、體外刺激等大量工作處理過的細(xì)胞，如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞被支原體污染了，怎么辦？由于前期工作量巨大，我們無法丟棄已有細(xì)胞。但由于價格原因，又無法使用那些昂貴試劑殺除細(xì)胞上的支原體，同時，實驗人員還需要清除細(xì)胞上的支原體污染，讓實驗得以往下推進(jìn)，以終獲得準(zhǔn)確的實驗數(shù)據(jù)。

實驗者可選用對支原體*的抑制劑，通過對細(xì)胞的前期處理，中期加藥，逐步通過4代左右的培養(yǎng)，從而將支原體污染*清除，確保試驗順利推進(jìn)，結(jié)果準(zhǔn)確。*此類試劑眾多，締一生物生物周圍的實驗人做過很多嘗試，其中效果確切且性價比很高的當(dāng)屬德國Minerva公司的ZellShield®祛除劑。

Zell Shield®是一種即用型新型復(fù)合抗生素，副作用極低，能有效地祛除細(xì)胞培養(yǎng)支原體、細(xì)菌、真菌污染。Zell Shield®使用方法簡單，直接加入培養(yǎng)基中保護(hù)細(xì)胞。

它的原理：通過抑制支原體增殖中某種蛋白的合成，達(dá)到抑制新的支原體增殖的目的。屬復(fù)合型的新型抗生素。它廣泛適用于細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的科研和工業(yè)領(lǐng)域。

特點(diǎn)

1、適用范圍廣

普通細(xì)胞培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)

2、無細(xì)胞毒性

目前，Zell Shield®對多種細(xì)胞系都無細(xì)胞毒性。

3、高效廣譜

祛除支原體效果明顯，同時對細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌、病原蟲、真菌等污染亦可有效預(yù)防。

4、操作簡便

可直接加入到預(yù)處理的培養(yǎng)基或細(xì)胞中進(jìn)行消毒。

5、穩(wěn)定性高

在細(xì)胞孵育期內(nèi)，Zell Shield®始終保持穩(wěn)定的活性。

6、低耐藥風(fēng)險

精心挑選的新型復(fù)合抗生素只有極低的耐藥風(fēng)險，多種抗生素聯(lián)合使用幾乎不會產(chǎn)生耐藥突變株。

操作步驟：

第1步：研究發(fā)現(xiàn)，98%的支原體污染發(fā)生在細(xì)胞間隙。因此，首先要把細(xì)胞消化下來，放入離心管，懸浮沖洗，離心，棄上清，反復(fù)三次。此時可將細(xì)胞上大部分的支原體去除，為進(jìn)一步加藥抑制做好準(zhǔn)備。

第二步：培養(yǎng)液中加入1%的ZellShield®，細(xì)胞進(jìn)行正常培養(yǎng)。新的支原體增殖受到抑制，舊的支原體隨著細(xì)胞的換液逐步減少，通過4代左右的培養(yǎng)，細(xì)胞中的支原體基本可被*清除。

注：使用ZellShield®時，不需使用鏈青霉素。

此試劑價格約2200元/50ml，可保證大量細(xì)胞的實驗得以順利推進(jìn)。

總之，細(xì)胞培養(yǎng)中，支原體污染發(fā)生頻繁。有時帶來的危害會造成實驗的巨大損失。應(yīng)經(jīng)常檢測和及時排除支原體污染，讓細(xì)胞在健康安全的環(huán)境下生長，為獲得準(zhǔn)確的實驗結(jié)果，打下良好的基礎(chǔ)。